九九精品99久久久香蕉,中文无码AV一区二区三区,精品一区二区三区无码免费直播,japanese老熟妇乱子伦视频

產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 可視的細(xì)胞趨化實驗

可視的細(xì)胞趨化實驗

更新時間:2016-06-17   更新時間:2016-06-17   點擊次數(shù):4411次

細(xì)胞趨化性(Chemotaxis,亦被稱為化學(xué)趨向性)是趨向性的一種,指細(xì)胞、細(xì)菌及其他單細(xì)胞、多細(xì)胞生物依據(jù)環(huán)境中某些化學(xué)物質(zhì)而趨向的運動。趨化性對細(xì)胞的發(fā)展和其他正常功能一樣*。

在生物材料移植的時候,快速的纖維血管化是成功移植的先決條件之一。尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)和組織型纖溶酶原激活物(tPA)或纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)在纖維蛋白溶解中都發(fā)揮了重要的作用。這三種蛋白近均被報道在無可溶纖維蛋白的細(xì)胞過程中有表現(xiàn)出*的作用,比如細(xì)胞粘附,遷移和增殖。

德國的科研人員發(fā)現(xiàn)使用內(nèi)皮細(xì)胞做趨化實驗,發(fā)現(xiàn)uPA,tPA和PAI-1對內(nèi)皮細(xì)胞的趨化遷移行為都有顯著的影響。

 

 

Components of the plasminogen activation system promote engraftment of porous polyethylene biomaterial via common and distinct effects.

Reichel CA, Hessenauer ME, Pflieger K, Rehberg M, Kanse SM, Zahler S, Krombach F, Berghaus A, Strieth S.
PloS one, 2015, 10.1371/journal.pone.0116883

 

 

一、實驗材料準(zhǔn)備:

 

  • 倒置顯微鏡,具有4X相差物鏡和定時拍照功能(Nikon)
  • 鏡載加熱孵育系統(tǒng)(37,5%CO2
  • 可選配置:全自動載物臺,自動對焦系統(tǒng)
  • 分析軟件:手動分析軟ImageJ的“Manual Tracking”模塊和ibidi公司的“Chemotaxis and Migration Tool” 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。
  • HUVEC 細(xì)胞  (Human umbilical vein endothelial cells from Promocell)
  • tPA,uPA,PAI-1 (Sino Biological)
  • Matrigel (Corning)
  • ECGM培養(yǎng)基 (Promocell)
  • 細(xì)胞趨化載玻片(圖一)        (ibidi)

 

圖一,ibidi 細(xì)胞趨化載玻片圖示,如圖所示,細(xì)胞種在中間通道,兩邊的儲液池可以放不同的刺激因子,從中間通道的觀測可以得到細(xì)胞對刺激因子的趨向性,本例是使用一邊加入uPA、tPA或PAI-1,另外一邊放入培養(yǎng)基作為實驗組,兩邊都放培養(yǎng)基作為對照組。

 

 

  • 細(xì)胞趨化實驗

 

 

  1. 實驗步驟

 

  • 將細(xì)胞與30%Matrigel的ECGM稀釋液混合,密度為3×106 cells/cm2,直接加入ibidi細(xì)胞趨化載玻片的中間通道中(圖二)

 

圖二,在觀測通道中加入細(xì)胞-基質(zhì)膠混合液

  • 將細(xì)胞趨化載玻片放入培養(yǎng)箱中30-35分鐘,等待膠凝結(jié)
  • 膠凝結(jié)后后分別在兩邊儲液池中加入60μl的30 ng/mL的uPA、20 ng/mL的tPA或1 μg/mL的PAI-1和無化學(xué)趨化物培養(yǎng)基作為細(xì)胞趨化實驗(+/-)(圖三)

圖三:加入X-lkd IIIA4抗體(紅色)和無化學(xué)趨化物培養(yǎng)基(藍(lán)色)

在兩邊儲液池中均加入60μl的無化學(xué)趨化物培養(yǎng)基作為空白對照(-/-)或均加入趨化因子為陽性對照(+/+)(圖四)

圖四:加入無化學(xué)趨化物培養(yǎng)基(藍(lán)色)作為空白對照

 

  • 按說明,將通道加液孔塞緊后可以進(jìn)行圖像采集
  • 將載玻片置入鏡載加熱孵育系統(tǒng)中,調(diào)整好采集位點,進(jìn)行20小時的觀測,每10分鐘采集一張圖片

 

  • 圖像數(shù)據(jù)處理
  1. 手動細(xì)胞軌跡追蹤
  • 下載ImageJ,并安裝Manual Tracking模塊
  • 導(dǎo)入采集的系列圖像到ImageJ中,打開模塊“Manual Tracking”,選擇“Add track開始記錄細(xì)胞軌跡
  • 選擇一個細(xì)胞,按照時間點單擊細(xì)胞,*點擊后,會有新窗口跳出來顯示初始位置,以后每次點擊,都將在這個新窗口中產(chǎn)生一個該細(xì)胞隨著時間的新坐標(biāo)
  • 統(tǒng)計完足夠的細(xì)胞軌跡后,保存軌跡坐標(biāo)表格
  • 至少收集30個細(xì)胞的軌跡才具有統(tǒng)計學(xué)意義,避免同一細(xì)胞追蹤兩次,去除由于凋亡會而不能采集完整的軌跡的細(xì)胞

 

四、實驗結(jié)果:

 

圖五:uPA,tPA和PAI-1對內(nèi)皮細(xì)胞的趨化遷移行為的影響。A)為在趨化因子存在下,HUVEC細(xì)胞的趨向性運動軌跡。B)為統(tǒng)計分析結(jié)果說明,HUVEC細(xì)胞對uPA,tPA和PAI-1都有證趨向行為。

聯(lián)


人妻无码久久久久久久久久久| 久久国产精品-国产精品| 色噜噜狠狠一区二区三区果冻| 阿娇全套94张未删图| 国产精品久久久久久无码| 欧美成人看片黄A免费看| 美女张开腿让男人桶爽| 国产H视频在线观看| 久久精品国产亚洲av无码| 西西444www无码大胆| 国产精品99久久久久久宅男| 公交车强摁做开腿呻吟| 我在ktv被六个男人玩一晚上| 99久久无色码中文字幕| 熟妇内谢69xxxxxa片| 人妻熟人中文字幕一区二区| 国产AV无码专区亚洲精品| 琪琪婷婷五月色综合久久| 英语老师解开裙子坐我腿中间 | 人妻丰满熟妇岳AV无码区HD| 日韩电影免费在线观看网址| 巜疯狂的少妇4做爰| 亚洲欧洲日产国码无码久久99| 色噜噜狠狠色综合成人网| 欧美肥婆另类bbwbbw| 青青草視頻國產av劇情超爽系列| 免费A级毛片无码免费视频120软件| 亚洲中文字幕久久精品无码喷水 | 亚洲欧美国产精品专区久久| 少妇人妻偷人精品无码视频| 国产av精品一区二区三区久久| 麻豆传媒视频| 免费看成人aa片无码视频吃奶| 国产精品久久久久9999高清| 久久久久久国产A免费观看 | 欧美av蜜桃一区二区蜜桃 | 人妻无码视频一区二区三区| 色哟哟免费精品网站入口| 一区二区三区在线观看| 欧美三级在线播放| 亚洲国产精品久久久久蜜桃网站 |